HPLC kolonnen tips

February 15

HPLC kolonnen tips

Kolonnen er en høy ytelse flytende kromatografi (HPLC)-systemet. Selv om det er litt mer enn en hul metall sylinder fylt med en porøs solid pakking, er kolonnen ansvarlig for å effektivt skille kjemiske komponenter av en blanding slik at de kan individuelt identifisert og kvantifisert. Det er flere triks av handelen som kan bidra til at kolonnen opererer med maksimal ytelse så lenge som mulig.

Løsemiddel Match

I HPLC, blir en løsningsmiddel kjent som "mobile fase" pumpet gjennom indre av kolonnen. Kjemikalier oppløst i denne løsemiddel skilles idet de passerer gjennom porøse solid innsiden. Kontroller at løsemiddelet du bruker den mobile fasen med en bestemt kolonne er egnet for bruk med pakking i kolonnen. For en "normal fase" kolonne fullpakket med silica gel, ikke-polar løsemidler som Heksan brukes ofte. For "omvendt fase" kolonner med ikke-polar pakninger er polar løsemidler, inkludert vann og metanol, ønskelig.

pH og buffere

Kolonnene har en grense på pH området av mobile fasen de tåler. Bruker en løsemiddel som overlegg surt eller altfor alkalisk kan dårlig skade og redusere kolonnen pakking. Kontroller at pH av mobile fasen er innenfor produsentens anbefalte. Bruk av bufret løsemidler (som inneholder oppløst kjemikalier) bør imøtekommes med forsiktighet også. Kontroller at du skylle ut alle buffer fra en kolonne før, for eksempel for å hindre oppløst kjemikalier fremskynde ut over tid og tilstopping kolonnen.

Retning

Mange kolonner kommer merket med en bestemt retning der den mobile fasen skal flyte gjennom kolonnen. Dette kan virke litt merkelig, siden kolonner er mer eller mindre symmetriske fra ende til ende, men det er normalt på grunn av plasseringen av en frit (et metall filter) i en eller begge endene av kolonnen, enten rett etter kolonnen innløp, eller like før utgangen. Inntaksfilteret er ment å fange partikler som ville ellers tette kolonnen og er utskiftbare. Reversering kolonnen stillinger i ikke-utskiftbare frit foran, betyr det kan være vanskeligere å fikse en tett kolonne.

Vakt kolonne

Ofte selger kolonnen leverandører også det som kalles "vakt kolonner." Vakt kolonnene er egentlig billig, miniatyr versjoner av normal kolonner og plasseres i den løsemiddel strømningsbane like før den virkelige kolonnen. Hvis en skadelige kjemiske injiseres på HPLC som kan, for eksempel binde til kolonnen pakking og tette det, det vil bli fanget av vakt kolonnen. Bruk av vakt kolonner kan stor forlenge levetiden til en kolonne.

Andre Tips

Unngå å utsette kolonner til overdreven varme eller kalde temperaturer, som kan redusere pakking. Også unngå ekstreme press på grunn av høy mobil flow priser. Disse belastningene kan komprimere pakking å opprette tomrom i kolonnen og gjengi det ineffektivt. Tilsvarende starter den mobile strømmen med ett langsom rate og deretter rampe opp til faktiske ønsket flow rate, unngå trykkstøt i kolonnen. Pass på at du vil filtrere alle løsemidler og prøver før de passerer gjennom kolonnen å unngå partikler som kan helt eller delvis koble kolonnen flyt banene.